돼지 급성 설사 증후군 코로나바이러스(SADS-CoV)는 새로 발견된 돼지 장내 병원성 코로나바이러스로 갓 태어난 새끼 돼지에게 물설사를 유발하고 양돈 산업에 상당한 경제적 손실을 초래할 수 있습니다.현재 SADS-CoV 감염 및 백신의 유효성을 평가하기 위한 적절한 혈청학적 방법이 없기 때문에 이러한 결핍을 보완하기 위해 효과적인 ELISA(효소결합면역흡착 분석법)를 사용할 필요가 시급합니다.여기서 인간 IgG Fc 도메인과 융합된 SADS-CoV 스파이크(S) 단백질을 발현하는 재조합 플라스미드를 제작하여 재조합 배큘로바이러스를 생산하고 HEK 293F 세포에서 발현시켰다.S-Fc 단백질은 protein G resin으로 정제되며 anti-human Fc 및 anti-SADS-CoV 항체와의 반응성을 유지합니다.그런 다음 S-Fc 단백질을 사용하여 간접 ELISA(S-iELISA)를 개발하고 S-iELISA의 반응 조건을 최적화했습니다.그 결과 면역형광법(IFA)과 웨스턴 블롯팅으로 확인된 40개 SADS-CoV 음성 혈청의 OD450nm 값을 분석한 결과 컷오프 값은 0.3711로 확인됐다.S-iELISA 실행 내 및 실행 사이의 6개 SADS-CoV 양성 혈청의 변동 계수(CV)는 모두 10% 미만이었습니다.교차반응성 시험에서 S-iELISA는 다른 돼지 바이러스 혈청과 교차반응이 없는 것으로 나타났다.또한, 111개의 임상 혈청 검체의 검출에 기초하여, IFA와 S-iELISA의 전체 일치율은 97.3%였다.혈청의 7가지 다른 OD450nm 값을 이용한 바이러스 중화 시험은 S-iELISA에 의해 검출된 OD450nm 값이 바이러스 중화 시험과 양의 상관관계가 있음을 보여주었다.마지막으로 S-iELISA는 돼지 농장 혈청 샘플 300개에 대해 수행되었습니다.다른 돼지 엔테로바이러스의 상용 키트에 따르면 SADS-CoV, TGEV, PDCoV 및 PEDV의 IgG 양성 비율은 각각 81.7%, 54% 및 65.3%였습니다., 각각 6%.결과는 S-iELISA가 특이적이고 민감하며 재현 가능하며 돼지 산업에서 SADS-CoV 감염을 감지하는 데 사용할 수 있음을 보여줍니다.이 글은 저작권의 보호를 받습니다.판권 소유.
게시 시간: 2021년 6월 22일